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黃曲霉毒素M1免疫親和柱

產(chǎn)品名稱(chēng):黃曲霉毒素M1免疫親和柱
產(chǎn)品品牌:HPSW
產(chǎn)品貨號(hào):06991-2530
產(chǎn)品規(guī)格:3ml
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【概要】
黃曲霉毒素(Aflatoxin)是黃曲霉、寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物,被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃分為1類(lèi)致癌物,同時(shí)又是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì),廣泛存在于各種食物中。玉米,花生,大米,小麥等谷物及其副產(chǎn)品是黃曲霉毒素的主要來(lái)源,同時(shí)飼料中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過(guò)動(dòng)物代謝后產(chǎn)生的黃曲霉毒素M1仍然具有很強(qiáng)的毒性和致癌性,也廣泛存在牛奶,血液,組織等食品中。黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一,也是胃癌,腸癌等疾病的主要原因,對(duì)人類(lèi)的健康構(gòu)成很大威脅。世界各國(guó)對(duì)食品,飼料中的黃曲霉毒素都有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。2010年6月1日開(kāi)始施行的乳品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測(cè)進(jìn)行了規(guī)定,主要使用的樣品前處理方法就是免疫親和柱凈化法。
 
【適用范圍及性能】
本公司真菌毒素免疫柱系列產(chǎn)品測(cè)試形式是一個(gè)高性能的免疫親和柱,設(shè)計(jì)用于在進(jìn)行 HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用 儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定)之前清理(凈化)或 濃縮樣本。
 
用于定性、定量檢測(cè)牛奶,奶粉,發(fā)酵乳,干酪,奶油等樣品中黃曲霉毒素M1的樣品前處理。
柱容量:≥200ng
回收率:≥90%
 
【試驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),黃曲霉毒素M1單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的黃曲霉毒素M1經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓髮悠诽崛∫壕徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉毒素M1免疫親和層析柱,在免疫親和柱內(nèi),毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素M1,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
 
【包裝組成】
黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)品(選配)
25支/盒,3mL柱管/支
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份
 
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備:
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
┅┅粉碎機(jī)
┅┅200mL/50mL量筒
┅┅天平:感量0.1g
┅┅酸度計(jì)
┅┅分液漏斗
┅┅微量移液器:?jiǎn)蔚?nbsp;100mL~1000mL
┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)
┅┅50mL漏斗
┅┅旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)
┅┅燒杯,容量瓶,錐形瓶等
試劑
┅┅甲醇(色譜級(jí))
┅┅乙腈(色譜級(jí))
┅┅石油醚
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)稱(chēng)取2g氫氧化鈉溶解于100mL水中
 
【樣本處理步驟】
(一)牛奶
┅┅將100mL牛奶水浴加熱至40 oC;
┅┅4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用
 
(二)乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品
┅┅稱(chēng)取10g奶粉樣品,將100mL50 oC水多次少量加入,攪拌,使奶粉充分溶解
┅┅6000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用
 
(三)發(fā)酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)
┅┅稱(chēng)取60 g混勻的試樣,用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計(jì)指示下調(diào)pH至7.4;
┅┅用高速均質(zhì)器在 9500 轉(zhuǎn)/分鐘下告訴勻漿5 min
┅┅水浴加熱至40 oC;
┅┅4000r/min離心15min,收集50mL清澈液待用
 
(四)干酪
┅┅稱(chēng)取經(jīng)切細(xì)、過(guò)10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中,加2 mL水和30 mL甲醇;
┅┅用高速均質(zhì)器在 9500r/分鐘下告訴勻漿5 min;
┅┅超聲提取30 min;
┅┅在6000r/分鐘下離心15 min,收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。
┅┅在分液漏斗中加入30 mL石油醚(4.3),振搖2 min;
┅┅待分層后,將下層移于50 mL燒杯中,棄去石油醚層。
┅┅重復(fù)用石油醚提取2次;。
┅┅將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中,減壓濃縮至約2 mL;┅┅濃縮液倒入離心管中,燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌,洗滌液一并倒入50 mL離心管中;
┅┅加水稀釋至約50 mL,在6000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心 5 min,上清液供凈化處理。
 
(五)奶油
┅┅稱(chēng)取5g試樣,置于50 mL燒杯中;
┅┅用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。
┅┅加20 mL水和30 mL甲醇,振蕩30 min后,將全部液體移于分液漏斗中;
┅┅待分層后,將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5 mL,加水稀釋至約50mL,供凈化處理。
 
【親和柱凈化步驟】
┅┅將免疫親和柱連接于50.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取50.0mL清澈液注入玻璃注射器;
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過(guò)柱體;
┅┅更換10ml玻璃注射器與親和柱連接,在注射器中加入10ml水,調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。
┅┅準(zhǔn)確加入4mL色譜級(jí)乙腈洗脫,流速為1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。
 
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后,收集到的乙腈洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè),也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。收集到的4ml洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當(dāng)于50ml牛奶樣品、發(fā)酵乳樣品或者5g奶粉樣品、干酪樣品和奶油樣品中黃曲霉毒素M1的含量。
如果HPLC檢測(cè)需要其它溶劑,可以將乙腈洗脫液氮?dú)獯蹈?,然后?fù)溶
 
【注意事項(xiàng)】
┅┅黃曲霉毒素危害極大,應(yīng)戴手套操作。
┅┅使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過(guò)夜。
┅┅不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。
 
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件:親和柱2-8℃保存,不可凍存。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。

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