產(chǎn)品名稱(chēng)：黃曲霉毒素總量免疫親和柱
產(chǎn)品品牌：HPSW
產(chǎn)品貨號(hào)：06990-2530
產(chǎn)品規(guī)格：3ml

【概要】
黃曲霉毒素（AFT）是一類(lèi)化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉 （aspergillus flavus）寄生曲霉 （a.parasiticus）產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機(jī)率最高。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類(lèi)致癌物，是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì).黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B₁最為多見(jiàn)，其毒性和致癌性也最強(qiáng)。B₁是最危險(xiǎn)的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測(cè)到。它們?cè)谧贤饩€(xiàn)照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類(lèi)及其衍生物。AFT已發(fā)現(xiàn)20余種。AFT主要污染糧油食品、動(dòng)植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類(lèi)、堅(jiān)果類(lèi)、肉類(lèi)、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。世界各國(guó)對(duì)食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。
【適用范圍及性能】
    真菌毒素免疫柱系列產(chǎn)品測(cè)試形式是一個(gè)高性能的免疫親和柱，設(shè)計(jì)用于在進(jìn)行 HPLC（高效液相色譜法）、GC-MS（氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用 儀）、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定）之前清理（凈化）或 濃縮樣本。
 
用于定性、定量檢測(cè)谷物、副食品、酒類(lèi)等食品和飼料等樣本中的黃曲霉毒素總量（B₁,B₂,G₁,G₂）時(shí)的樣品前處理。
總柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
 
【試驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，黃曲霉毒素單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓髮悠诽崛∫壕徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉毒素免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
【包裝組成】
黃曲霉毒素總量標(biāo)準(zhǔn)品（選配）
25支/盒，3mL柱管/支
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備：
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
┅┅粉碎機(jī)
┅┅200ml/50ml量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅微量移液器：?jiǎn)蔚?100ml～1000ml
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅玻璃微纖維濾紙（1.5mm孔徑）
┅┅50ml漏斗
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等）
試劑：
┅┅甲醇（色譜級(jí)）
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：稱(chēng)取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
┅┅吐溫-20/PBS溶液（0.1%）：取1mL吐溫-20，加入PBS緩沖溶液并定容至1000mL
【試劑配制】
樣品提取液：根據(jù)不同的樣品配置不同濃度的甲醇水溶液，作為樣品提取液。
 
【樣本處理步驟】
（一）花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料
┅┅取25g粉碎的樣品（植物油脂直接取樣，無(wú)需處理）與125mL甲醇-水（7：3）溶液混合或者使用125mL乙腈-水（84:16）提??；
┅┅加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取2分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過(guò)濾；
┅┅取15mL濾液并加入30mL水稀釋?zhuān)貌Ａ⒗w維濾紙過(guò)濾
┅┅取稀釋后液體待測(cè)；
┅┅取1支親和柱，將20.0mL玻璃注射器前端戳進(jìn)親和柱上端帽子上，注射器即可與親和柱連接。準(zhǔn)確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅確加入2.0mL色譜級(jí)甲醇或2mL色譜級(jí)乙腈洗脫，首先，將1ml洗脫溶劑加入免疫親和柱上方，使洗脫溶劑在重力作用下流動(dòng)。待洗脫溶劑通過(guò)免疫親和柱后，蓋好下帽，加入1mL洗脫溶劑，讓洗脫溶劑在免疫親和柱中保存30-60s，然后使剩余的洗脫溶劑通過(guò)免疫親和柱，流速為1 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，定容，供檢測(cè)用。
 
（二）醬油
┅┅取50g試樣與100mL甲醇-水（8：2）溶液混合；
┅┅加入2.5g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取1分鐘；
┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過(guò)濾；
┅┅取10mL濾液并加入40mL水稀釋?zhuān)貌Ａ⒗w維濾紙過(guò)濾
┅┅取稀釋后液體待測(cè)；
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅洗脫過(guò)程見(jiàn)實(shí)驗(yàn)例1。
 
（三）食醋
┅┅取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；
┅┅以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL；
┅┅4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過(guò)濾；
┅┅取10mL濾液并加入10mL水稀釋?zhuān)貌Ａ⒗w維濾紙過(guò)濾
┅┅取稀釋后液體待測(cè)。
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過(guò)免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過(guò)柱體；
┅┅洗脫過(guò)程見(jiàn)實(shí)驗(yàn)例1。
 
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè)，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當(dāng)于0.5g樣品中黃曲霉毒素含量。
【注意事項(xiàng)】
┅┅黃曲霉毒素危害極大，應(yīng)戴手套操作。
┅┅使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過(guò)夜。
┅┅不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。
 
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱2-8℃保存，不可凍存
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。